亮氨酸拉链转录因子
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酵母转录因子GCN4是通过亮氨酸拉链（bZIP）结构结合DNA的蛋白质之一，亮氨酸拉链区的2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构，而其基区由无规线团结构变为α螺旋。研究亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理，设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需氨基酸的折叠片段，并将其克隆到Escherichia coli BL21。讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件。
在蛋白质的小量表达试验中，重组子Escherichia coli BL21于5 mL含有50 μg/mL氨苄青霉素和34 μg/mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期，加入不同浓度的IPTG，继续培养以诱导蛋白质的表达。在不同的时间（如：诱导前，诱导2,4,6,8 h) 取样100 μL到1.5 mL离心管中、离心收集沉淀，将沉淀悬浮于样品缓冲液中，用10% SDS-PAGE检测。在10 L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中进行了大量表达，根据小量表达的试验结果确定了IPTG的浓度和诱导时间。
结果表明：含有这种拉链蛋白质的重组子Escherichia coli BL21在37℃下小量培养时，0.1～0.8 mmol的 IPTG均可在2～10 h内诱导该蛋白质表达；而在大量培养时，0.2 mmol和0.4 mmol的 IPTG在37℃均不可能诱导表达，只在28℃时才表达；小量培养和大量培养的最佳诱导时间为4～6 h，诱导剂 IPTG的浓度为0.2 mmol，大量表达的温度为28℃而不是 37℃。[1-3]
扩展资料
亮氨酸拉链（leucine zipper）：出现地DNA结合蛋白质和其它蛋白质中的一种结构基元（motif）。当来自同一个或不同多肽链的两个两用性的α-螺旋的疏水面（常常含有亮氨酸残基）相互作用形成一个圈对圈的二聚体结构时就形成了亮氨酸拉链
