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党参水提物对Ｄ－半乳糖致衰老小鼠肝组织ｍｉｃｒｏＲＮＡ表达谱的影响王
晶１，李海龙１，２，耿广琴１，楚惠媛１，王
勇１，陈
１彻（１．甘肃中医药大学，甘肃兰州７３００００；２．甘
肃省中药新产品创制省级工程实验室，甘肃兰州７３００００）摘要：目的
研究党参水提物对衰老模型小鼠肝组织microRNA（miRNA）表达谱的影响，探究中药党参抗衰老
将100只昆明种小鼠，随机分为正常对照组，D-半乳糖致衰老模型组，低、中、高党参
的分子机制。方法
剂量干预组。连续造模42d，随时监测模型小鼠的一般症状和体质量变化；并在造模结束后检测各组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和碱性磷酸酶（ALP）的值变化；利用AffymetrixmiRNA4.0微阵列芯片筛选了D-半乳糖致小鼠衰老和高剂量党参干预衰老过程中差异表达的miRNA，利用生物信息学工具对芯片结果进行聚类及信号通路分析。结果与正常对照组小鼠比较，衰老模型组小鼠血清ALT和ALP值显著升高（P＜0.05）；与衰老模型组比较，党参干预组小鼠血清ALT和ALP值有下降趋势，其中高剂量干预组ALP下降较显著（P＜0.05）；芯片聚类分析显示衰老模型组的miRNA表达谱与正常对照组和高剂量党参干预组明显分开，而高剂量党参干预组和正常对照组的miRNA表达谱聚在一起；D-半乳糖致衰老和党参抗衰老相关的差异表达miRNA主要都属于7个miRNA基因簇（miR-466a/bcluster、miR-297acluster、miR-145acluster、miR-486cluster、miR-299acluster、miR-127cluster和miR-134cluster）；生物信息学分析显示致衰老过程中差异表达miRNA的靶基因功P＜0.01），党参干预过程中差异表达miRNA的靶基因，参与调控的信号通路有能显著富集于29条信号通路（67个（P＜0.01）。结论中图分类号：Ｒ２８５．５
miRNA的靶向调控作用在D-半乳糖致衰老及党参抗衰老过程中发挥着重要作用。文献标志码：Ａ
文章编号：１００３－９７８３（２０１６）０１－００１１－０５
关键词：党参；衰老；miRNA；芯片；信号通路doi：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００３－９７８３．２０１６．０１．００３
EffectofRadixCodonopsisAqueousExtractonHepaticmicorRNAExpressionProfilingofAgingMiceInducedbyD-galactose
２１
ＷＡＮＧＪｉｎｇ１，ＬＩＨａｉｌｏｎｇ１，，ＧＥＮＧＧｕａｎｇｑｉｎ１，ＣＨＵＨｕｉｙｕａｎ１，ＷＡＮＧＹｏｎｇ１，ＣＨＥＮＣｈｅ（１．ＧａｎｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００００Ｇａｎｓｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＮｅｗＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００００Ｇａｎｓｕ，Ｃｈｉｎａ）
Abstract：ObjectiveＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＲａｄｉｘＣｏｄｏｎｏｐｓｉｓａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔ（ＲＣＡＥ）ｏｎｈｅｐａｔｉｃｍｉｃｏｒＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆａｇｉｎｇｍｉｃｅｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙＤ－ｇａｌａｃｔｏｓｅ．MethodsＯｎｅｈｕｎｄｒｅｄＫｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｌｏｗ－，ｍｉｄｄｌｅ－，ａｎｄｈｉｇｈ－ｄｏｓｅＲＣＡＥｇｒｏｕｐｓ．ＭｉｃｅｅｘｃｅｐｔｆｏｒｔｈｅｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎＤ－ｇａｌａｃｔｏｓｅｆｏｒ４２ｄａｙｓ，ａｎｄｍｉｃｅｏｆＲＣＡＥｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｇｉｖｅｎＲＣＡＥ．Ｄｕｒｉｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｓｙｍｐｔｏｍａｎｄｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｗｅｒｅｍｏｎｉｔｏｒｅｄａｔａｎｙｔｉｍｅ．Ａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｔｈｅｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆａｌａｎｉｎｅｔｒａｎｓｍｅｒａｓｅ（ＡＬＴ）ａｎｄａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＡＬＰ）ｉｎｍｉｃｅｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）ｒｅｌａｔｅｄｔｏａｎｔｉ－ａｇｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｗｉｔｈＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘｍｉＲＮＡ４．０ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ，ａｎｄｃｌｕｓｔｅｒｏｆｍｉＲＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙａｎｄｔｈｅｐａｔｈｗａｙｓｉｎｖｏｌｖｉｎｇｔｈｅｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｔｈｅｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｔｏｏｌｓ．ResultsＣｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＡＬＴａｎｄＡＬＰｌｅｖｅｌｓｉｎｍｏｕｓｅｓｅｒｕｍｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ（P＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ＡＬＴａｎｄＡＬＰｌｅｖｅｌｓｉｎＲＣＡＥｇｒｏｕｐｓｓｈｏｗｅｄａｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｔｅｎｄ，ａｎｄｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｏｆＡＬＰｉｎｈｉｇｈ－ｄｏｓｅＲＣＡＥｇｒｏｕｐｈａｄ
收稿日期：２０１５－０７－２９
作者简介：王晶，女，博士，副教授。研究方向：利用生物芯片进行药物的筛选、疾病机理研究。Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｊｉｎｇ＠ｇｓｚｙ．ｅｄｕ．ｃｎ通信作者：陈彻，博士，教授。Ｅｍａｉｌ：Ｃｈｅｎ７２１２３＠１６３．ｃｏｍ。基金项目：甘肃省高等学校科研项目（２０１３Ａ－０８７）；甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室开放基金项目（ＺＹＦＹＺＨ－ＫＪ－２０１５－００８）。
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TraditionalChineseDrugResearch＆ClinicalPharmacology，2016January，Vol．27No．1
ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（P＜０．０５）．ＴｈｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｍｉＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆｈｉｇｈ－ｄｏｓｅＲＣＡＥｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｂｒｏｕｇｈｔｔｏｇｅｔｈｅｒ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｃｌｅａｒｌｙｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅａｎｔｉ－ａｇｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗｅｒｅｍａｉｎｌｙａｔｔｒｉｂｕｔｅｄｔｏ７ｍｉＲＮＡｃｌｕｓｔｅｒｓ，ａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅｍｉＲ－４６６ａ／ｂｃｌｕｓｔｅｒ，ｍｉＲ－２９７ａｃｌｕｓｔｅｒ，ｍｉＲ－１４５ａｃｌｕｓｔｅｒ，ｍｉＲ－４８６ｃｌｕｓｔｅｒ，ｍｉＲ－２９９ａｃｌｕｓｔｅｒ，ｍｉＲ－１２７ｃｌｕｓｔｅｒ，ａｎｄｍｉＲ－１３４ｃｌｕｓｔｅｒ．Ｔｈｅｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓｉｎｔｈｅａｇｉｎｇ），ａｎｄｔｈｅｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｗｉｔｈｐｒｏｃｅｓｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＤ－ｇａｌａｃｔｏｓｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｒｉｃｈｅｄｉｎ２９ｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙｓ（P＜０．０１ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓｉｎｔｈｅｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｗｉｔｈＲＣＡＲｍａｉｎｌｙｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｄｉｎ６９ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ（P＜０．０１）．ConclusionＴｈｅｍｉＲＮＡ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅＤ－ｇａｌａｃｔｏｓｅ－ｉｎｄｕｃｅｄａｇｉｎｇａｎｄｔｈｅａｎｔｉ－ａｇｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＲＣＡＥ．
Keywords：ＲａｄｉｘＣｏｄｏｎｏｐｓｉｓ；ａｇｉｎｇ；ｍｉＲＮＡ；ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ；ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ
ＭｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是一类长约２０￣２５ｎｔ的非编码ＲＮＡｓ，通过对靶ｍＲＮＡ的转录后抑制作用调控其表达，在人的各种生命活动，如发育、衰老和肿瘤发生等过程中，发挥着重要功能［１］。党参，味甘性平，补中益气，是甘肃有名的道地药材，很多研究发现其有明显的抗衰老作用［２］。目前关于党参抗衰老作用及机制的研究已有很多报道，但衰老是一个复杂的多环节生物学过程，而且以中医的延年养生之道干预这一过程，必须考虑整体观念和辩证论治的结合［３－５］。鉴于当前从系统水平研究党参抗衰老机制研究鲜有报道，本研究利用生物芯片和生物信息学工具分析党参水提物对Ｄ－半乳糖致衰老小鼠后肝组织的ｍｉＲＮＡ表达谱的影响，以及ｍｉＲＮＡ的靶基因功能分析，拟从ｍｉＲＮＡ组学水平探讨党参抗衰老作用的机制。
1.4实验分组、模型复制及给药方法将１００只小
鼠，随机分为正常对照组，衰老模型组，低、中、高剂量党参干预组，每组２０只，雌雄各半。衰老模型组和党参低、中、高剂量干预组，每日每只小鼠颈背部皮下注射５０ｇ·Ｌ－１的Ｄ－半乳糖溶液，注射量为０．０２５ｍＬ·ｇ－１，正常对照组注射等体积量生理盐水。衰老模型的制备，参考龚国清等人［６］的方法，以体质量减轻和机体代谢紊乱为造模成功的标志。党参干预组采用灌胃给药法，每日上午按相当于生药量５，１０，１５ｇ·ｋｇ－１剂量给药，正常对照组和衰老模型组灌服等体积生理盐水，以上连续造模４２ｄ。1.5生化指标测定
动物处死前，先进行尾静脉取血
１ｍＬ，３０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，分离血清，用生化分析仪测定ＡＬＴ和ＡＬＰ。1.6miRNA芯片检测
利用液氮和Ｔｒｉｚｏｌ提取各组小
鼠肝组织的总ＲＮＡ，采用ＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘｍｉＲＮＡ４．０微阵列芯片（生物芯片北京国家工程研究中心提供），共有探针数目３０４２４条（包含所有物种）进行检测分析。整个实验过程严格按照博奥ＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘｍｉＲＮＡ４．０微阵列芯片实验指南进行。杂交完成的芯片采用ＧｅｎｅＣｈｉｐRＳｃａｎｎｅｒ３０００激光扫描仪进行扫描，再用ＡＧＣＣ软件（ＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘRＧｅｎｅＣｈｉｐRＣｏｍｍａｎｄＣｏｎｓｏｌｅRＳｏｆｔｗａｒｅ）对扫描得到的芯片图像进行分析，经过归一化和“坏点”剔除，选择荧光信号值在１０００以上，Ｃｙ５／Ｃｙ３≥２．０或≤０．５以上的ｍｉＲＮＡ为表达差异ｍｉＲＮＡ。
1.7生物信息学分析
利用ＣｌｕｔｅｒＶ３．０对芯片数据进
行聚类分析，利用ｍｉＲＢａｓｅＲｅｌｅａｓｅ２１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ／）数据库分析ｍｉＲＮＡｃｌｕｓｔｅｒ，采用Ａｒｇｏｎａｕｔｅ数据库（该数据库收录的ｍｉＲＮＡ靶基因是已被文献报道和实验证实过的）分析差异表达ｍｉＲＮＡ的靶基因［７］，在此基础上利用博奥晶芯生物分子功能注释系统
1材料与方法
1.1动物
ＳＰＦ级昆明种小鼠１００只，２月龄，雌雄
）ｇ，甘肃中医药大学科研实验动各半，体质量（１８±２物中心，合格证号：ＳＣＸＫ（甘）２０１１－０００１。1.2药物及试剂
党参，采自甘肃岷县，经甘肃中医
药大学中药资源教研室杜弢教授鉴定为白条党参。取党参１００ｇ，分２次煎煮，第１次加１０倍量水煎煮１ｈ，第２次加６倍水煎煮１ｈ，合并２次提取液，过滤后，浓缩成含生药０．５ｇ·ｍＬ－１的水煎剂，置４℃冰箱备用，水煎液每５ｄ制备１次。Ｄ－半乳糖，美国Ｓｉｇｍａ公司产品，批号：２４８９５２０７，临用前用生理盐水配制成１２ｇ·Ｌ－１，备用。谷丙转氨酶（ＡＬＴ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）测试试剂盒，上海酶联生物诊断技术有限公司，批号分别为：ｍｌ００２１６９和ｍｌ００２２３５。1.3仪器公司。
７０２０全自动生化分析仪，日本日立公司；
ＧｅｎｅＣｈｉｐRＳｃａｎｎｅｒ３０００激光扫描仪，美国Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ
中药新药与临床药理2016年1月第27卷第1期
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状；正常对照组小鼠依然活泼好动，皮毛顺滑有光泽，无明显脱毛现象；党参干预组动物接近正常对照组，而且高剂量党参干预组小鼠表现得较活跃。各组小鼠在造模４２ｄ中的平均体质量变化见表１，与正常对照组比较，衰老模型小鼠的平均体质量随造模时间的延长增加的幅度最小（P＜０．０５）；与衰老模型组比较，低剂量党参干预组小鼠体质量变化差异不大，而中剂量和高剂量组小鼠体质量均增加较明显，其中高剂量党参干预组显著高于衰老模型组（P＜０．０５），与正常对照组体质量增加相当。
ＭＡＳＶ４．０（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏ．ｃａｐｉｔａｌｂｉｏ．ｃｏｍ／ｍａｓ／）分析其所参与的信号通路显著性［８］。1.8统计学处理方法
实验数据分析用Ｅｘｃｅｌ软件进
行，结果用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，以P＜０．０５为差异有统计学意义。
2结果
2.1党参对D-半乳糖致衰老小鼠形态和体质量的影响造模４周后，模型小鼠开始出现精神萎靡、倦怠少动、食量下降、皮毛疏松欠光泽等一系列的衰老症
表1
D-半乳糖致衰老小鼠体质量增长变化及党参干预作用（x±s，g，n=20）
ＢｏｄｙｗｅｉｇｈｔｃｈａｎｇｅｓｏｆａｇｉｎｇｍｏｕｓｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙＤ－ｇａｌａｃｔｏｓｅａｎｄｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｅｆｆｅｃｔｏｆＣＰＰＳ
造模时间／周
１２１．７±１．６２１．９±２．７２２．０±３．１２２．１±２．５２１．８±１．０
２２４．１±２．２２３．２±１．８２３．５±３．５２３．０±１．５２４．７±１．３
３２５．８±２．８２４．５±１．８２４．９±３．０２４．７±１．６２６．２±１．２
４２７．２±２．７２５．２±１．６２５．７±２．４２５．９±１．６２７．６±１．６
５２８．９±２．１２６．２±１．３２６．０±２．８２６．７±２．０２８．５±１．７
６３０．７±１．８２６．９±１．３２７．３±３．０２７．８±２．０３０．１±１．６
７３１．５±２．０２７．８±１．２△２８．１±３．４２９．０±２．１３１．０±２．１＊
Ｔａｂｌｅ１
组别
正常对照组衰老模型组低剂量党参干预组中剂量党参干预组高剂量党参干预组
注：与正常对照组比较，△P＜０．０５；与衰老模型组比较，＊P＜０．０５。
2.2党参对D-半乳糖致衰老小鼠肝功能的影响图党参干预组小鼠肝组织的总ＲＮＡ，先分别将各实验组的样本收集在一起，每组共２０个样本，再利用试剂提取合并后样本的总ＲＮＡ，然后进行ｍｉＲＮＡ芯片检测。每个样本分别检测到１９０９个小鼠ｍｉＲＮＡ探针信号变化，将检测到的所有数据做聚类分析，发现衰老模型组和正常对照组的ｍｉＲＮＡ表达谱被明显分开，而高剂量党参干预组与正常对照组的ｍｉＲＮＡ表达谱却聚类在一起，见图２。这表明Ｄ－半乳糖致衰老过程中，ｍｉＲＮＡ的表达出现了异常调控，而党参干预
１。与正常对照组比较，衰老模型组小鼠肝功能指标中血清ＡＬＴ和ＡＬＰ明显上升（P>０．０５）；与衰老模型组比较，各浓度党参干预组小鼠血清ＡＬＴ和ＡＬＰ有下降趋势，其中党参高剂量干预组ＡＬＰ下降更明显（P<０．０５），接近正常对照组水平。
２５０２００１５０１００５００
ＡＬＴ
ＡＬＰ
△
△
＊
正常对照组衰老模型组低剂量党参干预组中剂量党参干预组高剂量党参干预组
可以逆转ｍｉＲＮＡ的异常表达。在芯片结果中，许多差异表达的ｍｉＲＮＡ属于一些ｍｉＲＮＡ基因簇，即染色体上彼此紧密相邻的两个或多个基因构成的基因群［８］，如表２所示。
2.4党参干预D-半乳糖致衰老小鼠肝组织miRNA靶基因的信号通路分析
利用Ａｒｇｏｎａｕｔｅ数据库和
ＭＡＳ分析工具，发现在Ｄ－半乳糖致小鼠衰老过程中差异表达的ｍｉＲＮＡ有１９７个已证实的靶基因，参与到７２条ＫＥＧＧ信号通路中，通过显著性分析，有２９）。在高剂量党参干预衰老条通路显著富集（P＜０．０１过程中，差异表达ｍｉＲＮＡ已证实的靶基因有１２３个，其参与的信号通路有９１条，其中６７条通路显著富集（P＜０．０１）。根据P值排序，将分析结果中的前２０条信号通路整理于表３中。
数值／Ｕ·ｍＬ－１肝功能指标
注：与正常对照组比较，△P＜０．０５；与衰老模型组比较，＊P＜０．０５。
图1D-半乳糖致衰老小鼠的肝功能与党参干预的影响（n=20）Ｆｉｇｕｒｅ１
ＬｉｖｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆａｇｉｎｇｍｏｕｓｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙＤ－ｇａｌａｃｔｏｓｅ
ａｎｄｉｎｖｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｅｆｆｅｃｔｏｆＣＰＰＳ
2.3党参对D-半乳糖致衰老小鼠肝组织miRNA表达谱的影响
提取正常对照组、衰老模型组和高剂量
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TraditionalChineseDrugResearch＆ClinicalPharmacology，2016January，Vol．27No．1
3讨论
衰老过程涉及遗传和环境等多个复杂因素，表现
衰老模型组
为各个组织器官功能的衰退和紊乱，是一个不可逆转的现象［１０］。虽然不可逆，但是可以缓解，随着人民生活水平的提高，探讨衰老的机制以及寻求抗衰老的方法，成为当今医学界的研究热点之一。本研究从动物学实验模型和肝功能生化检测，证实了党参水提物在抗衰老研究中的重要作用。为了探寻其中的机制，本研究从ｍｉＲＮＡ进行入手，这是近些年发现的一类在细胞中起重要调控作用的小分子ＲＮＡ。在２０１３年Ｃｅｌｌ杂志上列出的９个衰老标志物，其中就涉及ｍｉＲＮＡ［１１］。通过聚类分析，研究证实党参的确从分子水平影响和干预了我们构建的衰老模型。另外，研究发现与党参抗衰老研究相关的差异表达ｍｉＲＮＡ大都属于一些基因簇，其中典型的有７个（ｍｉＲ－４６６ａ／ｂｃｌｕｓｔｅｒ、ｍｉＲ－２９７ａｃｌｕｓｔｅｒ、ｍｉＲ－１４５ａｃｌｕｓｔｅｒ、ｍｉＲ－４８６ｃｌｕｓｔｅｒ、ｍｉＲ－２９９ａｃｌｕｓｔｅｒ、ｍｉＲ－１２７ｃｌｕｓｔｅｒ和ｍｉＲ－１３４ｃｌｕｓｔｅｒ）。有研究报道ｍｉＲＮＡ基因簇的表达和功能有协同性的特点［１２］，本研究结果与报道相一致。
值得注意的是，在衰老模型组比正常对照组中表达上调的ｍｉＲ－４６６ａｃｌｕｓｔｅｒ在党参干预组比衰老模型组中表达下调了；而在衰老模型组比正常对照组中表
图2正常对照组、衰老模型组和高剂量党参干预组小鼠肝脏
ＴｈｅｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｉＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｓｏｆ
组织miRNA表达谱聚类分析图Ｆｉｇｕｒｅ２
ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆＣＰＰＳｉｎｖｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｇｒｏｕｐ表2
正常对照组比衰老模型组、高剂量党参干预组比衰老模型组差异表达的miRNA基因簇
ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｃｌｕｓｔｅｒｓｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｏｕｐｖｅｒｓｕｓａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｏｕｐ，ａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆＣＰＰＳｉｎｖｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ
正常对照组比衰老模型组
高剂量党参干预组比衰老模型组
表达变化倍数
５．８８３８２．５８７５６．９２０３５．９１４７７．６２５１２．５８７５６．８９２９３．８８４１２．７６０５６．８３８８６．６６７８４．２１１５５．９１４７０．３７８５０．４２１６０．４４２１０．４４２１０．４５８９０．６７７５
ｍｉＲＮＡ基因簇ｍｉＲ－１２７ｍｉＲ－２９９ａｍｉＲ－１３４ｍｉＲ－１４５ａｍｉＲ－４６６ａｍｉＲ－４８６
ｍｉＲＮＡｍｉＲ－１２７－３ｐｍｉＲ－６６５－３ｐｍｉＲ－３７９－５ｐｍｉＲ－６６７－３ｐｍｉＲ－３８２－５ｐｍｉＲ－５４１－５ｐｍｉＲ－１４５ａ－５ｐｍｉＲ－６６９ｃ－５ｐｍｉＲ－４６６ｈ－３ｐｍｉＲ－４８６－５ｐｍｉＲ－３１０７－５ｐ
表达变化倍数
２．０６８４２．８３２９４．０５１１８．５０８８９２．０７６６２．４１５０．４５３９０．３９５０．３９８０．３３２０．３３２
Ｔａｂｌｅ２
ｇｒｏｕｐｖｅｒｓｕｓａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｏｕｐ
ｍｉＲＮＡ基因簇
ｍｉＲＮＡｍｉＲ－２９７ａ－５ｐｍｉＲ－６６９ａ－５ｐ
ｍｉＲ－４６６ａ
ｍｉＲ－４６６ｈ－５ｐｍｉＲ－６６９ｍ－５ｐｍｉＲ－６６９ｏ－５ｐ
ｍｉＲ－４６６ｂ
ｍｉＲ－６６９ｐ－５ｐｍｉＲ－６６９ｂ－５ｐｍｉＲ－４６６ｆ－５ｐｍｉＲ－６６９ｄ－５ｐ
ｍｉＲ－２９７ａ－２
ｍｉＲ－６６９ｆ－５ｐｍｉＲ－６６９ｅ－５ｐｍｉＲ－６６９ｌ－５ｐｍｉＲ－４６６ｍ－５ｐ
ｍｉＲ－１４５ａｍｉＲ－４８６ｍｉＲ－２９９ａ
ｍｉＲ－１４５ａ－５ｐｍｉＲ－１４３－３ｐｍｉＲ－４８６－５ｐｍｉＲ－３１０７－５ｐｍｉＲ－３７９－５ｐｍｉＲ－６６７－３ｐ
中药新药与临床药理2016年1月第27卷第1期
表3正常对照组比衰老模型组、高剂量党参干预组比衰老模型组差异表达miRNA的靶基因所参与的信号通路（前20位）Ｔａｂｌｅ３Ｔｈｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｉＲＮＡｓｔａｇｅｔｇｅｎｅｓｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｖｅｒｓａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆＣＰＰＳｉｎｖｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｇｒｏｕｐｖｅｒｓａｇｉｎｇｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（Ｔｏｐ２０）
正常对照组比衰老模型组信号通路Ｍｅｌａｎｏｍａｐ５３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＣｅｌｌｃｙｃｌｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｎｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎＣａｌｃｉｕｍｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＤｉｓｏｒｄｅｒｓＡｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａＧｌｉｏｍａＲｅｎａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａＶＥＧＦｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＰＰＡＲｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＡｄｈｅｒｅｎｓｊｕｎｃｔｉｏｎＥｒｂＢｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＰｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒＣｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒＳｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒＧｎＲＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＭｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓP值８．５６Ｅ－０８８．５６Ｅ－０８２．４０Ｅ－０７３．５０Ｅ－０７２．４８Ｅ－０６６．１５Ｅ－０５６．１５Ｅ－０５１．２１Ｅ－０４１．３３Ｅ－０４１．３３Ｅ－０４１．３３Ｅ－０４１．３３Ｅ－０４１．３３Ｅ－０４１．５６Ｅ－０４１．５６Ｅ－０４１．５６Ｅ－０４１．５６Ｅ－０４１．５６Ｅ－０４１．５６Ｅ－０４ＭｅｌａｎｏｍａＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＡｄｉｐｏｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＭｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓｐ５３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＴｙｐｅＩＩｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓＩｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＳｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒＴＧＦ－ｂｅｔａｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＧｌｉｏｍａＣｅｌｌｃｙｃｌｅＰａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒＣｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒＡｐｏｐｔｏｓｉｓＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒＦｏｃａｌａｄｈｅｓｉｏｎＣｅｌｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎＡｄｈｅｒｅｎｓｊｕｎｃｔｉｏｎＡｄｉｐｏｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ８．５６Ｅ－０８高剂量党参干预组比衰老模型组信号通路ＰｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒP值７．８７Ｅ－１９７．６８Ｅ－１８５．８６Ｅ－１７４．３４Ｅ－１６１．８６Ｅ－１４１．０９Ｅ－１３３．０２Ｅ－１３３．１５Ｅ－１３８．８３Ｅ－１３９．６３Ｅ－１３６．３Ｅ－１２７．９１Ｅ－１２１．２８Ｅ－１１５．９９Ｅ－１１５．９９Ｅ－１１１．０６Ｅ－１０３．０６Ｅ－１０６．４１Ｅ－１０１．１１Ｅ－０９·１５·
研究中没有被报道过。
综上所述，本研究利用ｍｉＲＮＡ表达谱芯片筛选了与Ｄ－半乳糖致小鼠衰老和党参水提物抗衰老相关的差异表达ｍｉＲＮＡ；并结合生物信息学工具揭示了在这些过程中起显著作用的信号通路，为研究衰老及党参抗衰老治疗提供了重要资料。参考文献：
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ＩｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｍｉｃｒｏＲＮＡｓ
ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｇｉｎｇｏｆｔｈｅｌａｔｅｒａｌｗａｌｌｏｆｔｈｅｃｏｃｈｌｅａｒｄｕｃｔ［Ｊ］．ＰＬｏＳ
Ａｒｇｏｎａｕｔｅ－－ａ
ｄａｔａｂａｓｅｆｏｒｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｂｙｍａｍｍａｌｉａｎｍｉｃｒｏＲＮＡｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ｍａｔｕｒｉｔｙｏｎｓｅｔｄｉａｂｅｔｅｓｏｆｔｈｅｙｏｕｎｇ９．２６Ｅ－１８达下调的ｍｉＲ－２９９ａｃｌｕｓｔｅｒ在党参干预组比衰老模型组中却显著上调了，这表明这些ｍｉＲＮＡ基因簇在党参干预Ｄ－半乳糖致小鼠衰老的过程中发挥着重要的功能。研究已报道ｍｉＲ－４６６ａｃｌｕｓｔｅｒ位于２号染色体Ｓｆｍｂｔ２基因的内含子１０中，是一系列促凋亡因子，参与调控哺乳动物的凋亡通路［１３］。而且ｍｉＲ－２９９ｃｌｕｓｔｅｒ中的ｍｉＲ－３７９也被研究证实调控ＣｙｃｌｉｎＢ１，在肿瘤、衰老等疾病中表达下调［１４－１５］。本研究再一次证明了这些ｍｉＲＮＡ在调控细胞凋亡增殖方面的功能，并提示其可能是党参抗衰老机制中的靶点。
研究通过分析ｍｉＲＮＡ靶基因所富集的信号通路，发现Ｄ－半乳糖致衰老过程中，主要涉及的信号通路有ｐ５３通路、ＭＡＰＫ通路和细胞周期等；在党参抗衰老过程中，主要参与的通路也出现了ｐ５３通路、ＭＡＰＫ通路和细胞周期，表明这些通路在党参抗衰老机制中起到非常重要的作用。另外，研究发现凋亡通路也参与党参的抗衰老作用，这与之前的研究报道一致［１６］。除此以外，本研究还发现ＴＧＦ－β信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路和细胞粘连等与党参的抗衰老也有密切关系，这些结果在之前的
（编辑：修春）
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