一２１８一 江苏农业科学２０１３年第４１卷第５期 林珏，杜军，刘光迅，等．锦鲤品种选育与体色选择试验［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（５）：２１８—２２０ 锦鲤品种选育与体色选择试验 林珏 ，杜军 ，刘光迅 ，赵 刚 ，周 剑 ，柯红雨 ，刘 超 ，龙海雨 （１．四川省农业科学院水产研究所，四川成都６１１７３１； ２．四川省生物资源保护与可持续利用实验室，四川成都６１００４１） 摘要：为了获得优质的锦鲤后代，对锦鲤进行了品种选育和体色选择试验，取得了良好的效果。在试验的基础 上，总结出锦鲤亲鱼培育、人工繁育和体色选择的方法，为锦鲤品种的选育和体色选择提供了技术指导。 关键词：锦鲤；选育；体色选择 中图分类号：￥９１７．４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０５—０２１８—０２ 锦鲤以艳丽的体色、美丽的斑纹、雄健的泳姿博得了人们 的喜爱，近年来，风糜日本和中国港澳地区，行销欧美。在我 国很早就有庭院和庙宇饲养红色鲤鱼的记载。１６０年来，日 本各地广泛进行了观赏鲤鱼的杂交培育，选育了美丽多彩的 鳍，雄鱼的胸鳍较大，雌鱼小而椭圆，另外雄鱼的胸鳍粗壮强 硬，鳃盖和胸鳍的第一鳍条基部有粒状突起，称为“追星”，手 触摸有粗糙感；（３）腹部，雄鱼的腹部小而硬，雌鱼腹胀而柔 软；（４）肛门，繁殖前期，雄鱼的肛门小而凹，雌鱼稍阔而扁 平，用手挤压，雄鱼有乳白色精液流出。 亲鱼挑选：雌亲鱼首先要求健康无伤病，卵巢发育良好、 有卵巢轮廓，适度丰满，色泽浓郁、色块清晰，符合品种顶级质 量要求。雄鱼要求健壮而比雌性亲鱼略微修长，腹部没有明 现代日本锦鲤。锦鲤的繁殖习性与鲤极其相似，人工繁殖的 方法也基本相同；但是，要获得优质的锦鲤后代，最大限度地 保持锦鲤群体优良形状，维持优良品质，需要从亲鱼的培育和 苗种优选开始，同时要做一系列的育种工作 ｊ。本试验于 ２００８年在四川省农业科学院水产研究所进行，开展了锦鲤亲 鱼池塘培育试验，２０１０年春季进行人工选育和体色选择试 验，取得了较好的效果。 １材料与方法 １．１池塘条件 显膨大的个体，其他要求与雌鱼类似。 １．３．４配对繁殖 主要采用注射催产激素自然产卵方式。 注射用促黄体素释放激素ＬＲＨ—Ａ ，地欧酮（ＤＯＭ），绒毛膜 （ＨＣＧ），０．７％生理盐水为溶剂。繁殖时间在４月２３日至５ 月１５日之间，水温上升至２３℃时进行配对催产。 １．３．５体色选择试验试验用锦鲤为２０ ｃｍ左右的红自１ 亲鱼培育池６个，长方形、水泥底、面积０．１ ｈｍ ，水深 龄鱼种，每个重复２００尾鱼，养殖池塘为４个，规格为４０ ｉｎ× ２６ ｉｎ×１．２ ｍ的室外土质池塘。每天用一定量的试验料和对 照料表观饱食投喂６次，投喂时间分别为０８：０ｏ、１０：０ｏ、 １２：０ｏ、１４：０ｏ、１６：０ｏ和１８：００。 １．５ Ｉｎ，注排水方便，光照、通风良好。水源为无污染的地下 水和河水。条件相同的长方形产卵池２个，深１．５ ｍ，面积均 为４０ ｍ 。孵化池为４个鱼苗培育池，面积均为０．１ ｈｍ ，可 保持水深１．２ ｎｌ。 １．２亲鱼 试验所用的增艳物质为光合细菌和小球藻的混合制剂， 其中光合细菌细胞浓度达到５０，ｆ￣／ｍＬ以上，是农业部规定 采用１９９７年日本友人赠送的１０８尾精品锦鲤的后代，共 的２０亿／ｍＬ光合细菌产品细胞浓度标准的２．５倍。 基础膨化饲料配方包括鱼粉、鸡肉粉、豆粕、面粉、麦胚 计１００尾，其中红白２３组，大正三色２１组，黄金、白金各２ 组，其他品系２组。其中雌亲鱼５１尾，雄亲鱼４９尾。 １．３选育方法 粉、大豆磷脂和预混料，饲料在通威饲料有限公司定制。试验 料为在投喂前将液体状的增艳物质按１５％～２０％投喂量的 比例拌饵投喂，对照料为不加受试物的基础饲料，每种料设２ 个重复处理组 。 １．３．１试验鱼的隔离防杂选育试验组和对照组鱼，在不同 试验的育种基础群是百 的场所饲养，严格隔离，不养其他品种。 １．３．２育种基础群和亲鱼繁育群养殖试验结束后，各养殖池分别随机取鱼２０尾，根据 ＣＲ一４００色彩色差计（Ｍｉｎｏｌｔａ），对锦鲤体表的红色色块和白 质的亮度￡ （１ｉｇｈｔｎｅｓｓ）、红度口’（ｒｅｄｎｅｓｓ）、黄度ｂ‘（ｙｅｌｌｏｗ— ｎｅｓｓ）、色度Ｃ‘（ｃｈｒｏｍａ）进行定量测量。 试验数据以平均数±标准误表示，测得方差同质性，比较 万尾以上大群体的锦鲤鱼种。试验组亲鱼繁育群是在育种基 础群中，经多级选择，择优选留培育的供繁育用的成年种鱼。 试验组繁育群的规模为１ ０００组以上，即２ ０００尾以上（雌雄 比为１：２）。相似规模的未选育群体作为对照组。 １．３．３亲鱼培养和挑选雌雄鉴别：（１）体型，雄鱼的头部 大而短，体态瘦长，雌鱼的头部小而长，腹腔特别大；（２）胸 平均数用单因子方差进行统计分析。用Ｄｕｎｃａｎ’Ｓ法进行多 重比较，所有试验数据用ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ８．０软件进行统计 分析。 收稿Ｅｌ期：２０１３—０２—２６ ２结果与分析 基金项目：四川省财政育种工程青年基金（编号：２０１０ＱＮＪＪ－０２９）。 作者简介：林珏（１９７５一），女，安徽蚌埠人，助理研究员，主要从事 ２．１ 亲鱼产前培育水温与繁殖力 整个过程中早期（１月１日至２月１９日）是属于不摄食 水产养殖技术研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｉｍｇｉｄｗｘ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｉｎ．Ｏ＂１。 林珏等：锦鲤品种选育与体色选择试验 继续饲养。 ２．２增艳物质对锦鲤体色的影响 ．－——２１９－－—— 阶段；中期（２月２７日至３月２５日）是亲本营养强化培育阶 段；后期（３月２６日至４月２２日）是性腺促熟阶段。 由于锦鲤亲鱼雌鱼年龄均已达４冬龄，卵巢发育良好，繁 殖机能旺盛，怀卵量较大；雄鱼发育很好，受精率也较高。直 接用鱼苗池进行锦鲤受精卵的孵化，共培育锦鲤夏花鱼种 色差仪所测出的红质红度值是对红色的定量分析指标， 值越高表示色块越红。从表１可以看出，红白试验组的红质 红度值与对照组虽然差异不显著，但绝对值比对照组的提高 了ｌ２．ｏ７％，说明该增艳物质能提高锦鲤的红色。 １５０万尾，经过３次挑选后剩余约ｌＯ万尾锦鲤作为夏花鱼种 表１增艳物质对锦鲤体表色块的影响 亮度是指发光体（反光体）表面发光（反光）强弱的物理 量，它是颜色的一种性质，或与颜色多明亮有关系的色彩空间 纹的品种配对。繁殖用的亲鱼应选择品种特征明显，体格强 健，体色鲜艳，色斑呈云朵状，色纯无杂点，遗传性状稳定，性 腺发育成熟的锦鲤。 锦鲤雌性最佳繁殖年龄为３ ～６ ，特别优异的个体可 以在７ ～８ 时仍然作亲鱼使用。雌雄分塘时可挑选２ ～ ５ 的雌鱼，经产鱼以其子代的质量为主要挑选依据，淘汰子 代质量不佳、年龄过大的个体，优质锦鲤的雌鱼一般不会连续 ３年用于繁殖，因此４ 或以上的雌鱼应根据记录，考虑次年 春是否用于繁殖，从后备亲鱼补充进入产卵群体的鱼则需要 的一个维度。对于锦鲤的红质而言，亮度越高表示颜色越鲜 亮。本试验的红质亮度值表现出了与红度值相同的趋势：红 白试验组的红质亮度值比对照组提高了４．２６％。 颜色的色度是指不包括亮度在内的颜色的性质，它反映 的是颜色的色调和饱和度。色调是指物体反射的光线中以哪 种波长占优势来决定，不同波长产生不同颜色的感觉，在明 度、纯度、色相这３个要素中，某种因素起主导作用，就称之为 某种色调。饱和度是指色彩的鲜艳程度，也称色彩的纯度。 饱和度取决于该色中含色成分和消色成分的比例。含色成分 越大，饱和度越大；消色成分越大，饱和度越小。本试验的红 仔细挑选。补充雌亲鱼的挑选要求健康无伤病，卵巢发育良 好有卵巢轮廓，适度丰满，色泽浓郁色块清晰，符合品种顶级 质量要求 。雄鱼最佳繁殖年龄为２ 一４ ，因此分塘时应 选留年龄１ ～３ 的个体。 ３．２幼鱼挑选 色块，红光波长占了绝对优势，整体上是呈暖色调，本试验色 度值主要评价的是红色的饱和度。从色度值来看，试验组的 色度值均高于对照组，说明试验组红质的饱和度较高，即其中 的含色成分较对照组的多 。 在选择健康苗种标准的基础上，再根据锦鲤的评判标准 进行选优。从锦鲤的品系特征要求出发，要考虑锦鲤长大后 在对锦鲤的体色进行评价时，白质部分应该越白越好，如 体表的图案和色泽的可能变化，仔细分析才能挑选出优质的 锦鲤。严格按品系分类进行雌雄搭配繁殖后代，在子一代有 较高的选优率。 挑选的要点：首先去掉畸形、色彩不鲜艳的鱼。还要依照 花纹的生长状况和质量好坏的标准进行挑选，红白系锦鲤，红 斑纹颜色淡的应淘汰；黄金系锦鲤头部无光泽、鳞片覆盖不 好、鱼体杂斑多、胸鳍生长不好的也要淘汰。当锦鲤苗长到全 果白质部分偏黄，或有杂色，则锦鲤的品质将会受到影响，因 此白质部分的黄度值应该越低越好。从表１可以看出，红白 试验组白质的黄度值比对照组低６．１５％，说明该增艳物质除 了能提高红色的显色以外，同时还具有改善白质的作用；红白 试验组与对照组间的白质亮度值间差异不显著。 试验所用的增艳物质对锦鲤有较好的增艳扬色作用，但 试验仅进行了５０ ｄ，投喂时间较短，如果进一步延长投喂时 间，该物质的增艳作用可能会更明显。 ２．３遗传性能 长５～６ ｃｍ时，颜色和体形已初步显现，除昭和三色（此品种 应尽早挑选，１ ｅｍ之前即可开始）之外，所有品种都可在此时 进行第二次挑选 。 ‘ 试验均选择品系较纯的锦鲤亲鱼进行繁殖，遗传性能稳 定，体表有彩色及色斑的鱼占８０％～９０％，反族现象（后代体 表无彩色或色斑出现率）比例较低，一般为１０％～２０％。 ３结论与讨论 ３．１配对繁殖 长期的育种实践发现，即使是同一品种，在不同的鱼场， 由于亲鱼的来源、选种保种方法及亲本管理水平的不同，它们 之间存在着很大的差异。因此，品种选育改良的育种基础群 及育种方法十分重要。 ３．３增艳物质 本试验所用的增艳物质为液体，添加量为１５％一２０％， 锦鲤的斑纹有很多的色泽和形态、分布的变化，但并非全 要求所用的饲料为膨化饲料，以便能将足量的增艳物质加入 到饲料中。在按饲料投喂量１５％～２０％的比例添加的情况 下，试验所用的天然物质对锦鲤有明显的增艳作用。 参考文献： ［１］毛建春．锦鲤人工繁殖及苗种选育技术［Ｊ］．黑龙江水产，２００９ （６）：１７—１９． 无规律；品系或品种的起源各不相同，某些是选育而成，某些 是按照经验模式杂交而成，如果不同品种随意配种，很可能在 后代中，无上品后代，而且因为种系的混杂，使后代失去作为 种鱼的价值，因此配种一定要注意品系问题 ］。 总体规律是主要品系一般采用同品系配对；红白是锦鲤 的基本型、原始型品种，可以作为亲本之一与其他带有红色斑 －－——２２０．－—— 艺，李槿年，兰江苏农业科学２０１３年第４ｌ卷第５期 王云，等．鲫鱼鳃中迟钝爱德华氏菌的分离与鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（５）：２２０—２２１ 鲫鱼鳃中迟钝爱德华氏菌的分离与鉴定 王 艺 ，李槿年 ，兰 云 ，胡秀彩 ，沈晓静。，李 雪 ，吕爱军 （１．安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥２３００３６；２．江苏师范大学生命科学学院，江苏徐州２２１１１６） 摘要：以市售鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｔ￣）为研究对象，从鳃中分离获得一株细菌，编号为Ｅｔ一１，通过细菌形态学观 察、理化特征鉴定、１６Ｓ ｒＤＮＡ克隆测序及系统发育进化树构建等方法进行系统鉴定，结果表明Ｅｔ一１菌株为革兰阴性 杆菌，进一步ＰＣＲ扩增Ｅｔ一１菌株的１６Ｓ ｒＤＮＡ序列为１ ５０８ ｂｐ；系统进化树分析表明，Ｅｔ一１菌株与迟钝爱德华氏菌 （Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ）亲缘关系最近，自然聚为一支，序列同源性达９８．７％一１００％，最终确定Ｅｔ一１为迟钝爱德华氏菌。 关键词：鲫鱼；鳃；迟钝爱德华氏菌；分离鉴定；ＤＮＡ测序 中图分类号：ｓ９１７．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０５—０２２０—０２ 鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）是一种杂食性鱼类，也是水产养 殖的优质鱼类。细菌性疾病是造成鲫鱼生产乃至水产业严重 １．１材料 鲫鱼（０．２～０．３ ｋｇ）购自徐州市某菜市场，迅速带回实验 损失的重要疾病之一…。爱德华氏菌属（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）细菌 常引起鱼类的败血症，主要包括迟钝爱德华氏菌（Ｅ ｔａｒｄａ）、 鲴爱德华氏菌（Ｅ ｉｃｔａｌｕｒｉ）和保科爱德华氏菌（Ｅ ｈｏｓｈｉ一 ，啪） 。邓先余等从患红头病的黄颡鱼（Ｐｅｌｔｅｏｂａｇｒｕｓ 一 ￣ｒａｃｏ）、患腹水病的牙鲆（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）体内分离获 得了迟钝爱德华氏菌病原菌 。迟钝爱德华氏菌是爱德华 氏菌属的模式种，宿主十分广泛，是感染淡水鱼和海水鱼的主 要病原菌之一。此外，迟钝爱德华氏菌是爱德华菌属中唯一 的人畜共患病病原菌 。 近几年来，鱼类微生态学成为了国内外学者研究的热点 室备用。ＬＢ培养基、ｓｓ琼脂培养基、细菌微量生化鉴定管及 三糖铁（ＴＳＩ）培养基等购自杭州微生物试剂有限公司。细菌 基因组提取试剂盒、ＤＮＡ胶回收试剂盒、ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ等购 自上海生工生物工程公司，ｐＭＤ１８一Ｔ Ｖｅｃｔｏｒ试剂盒购自 ＴａＫａＲａ公司。 １．２方法 １．２．１细菌分离、形态观察与生化试验参照胡秀彩等的方 法 进行，将纯化细菌分别接种于ｌ９种微量发酵管中，２９ 培养２４～４８ ｈ，观察细菌的生理生化反应。 １．２．２细菌总ＤＮＡ提取、１６Ｓ ｒＤＮＡ ＰＣＲ扩增及系统发育树 分析采用细菌基因组提取试剂盒提取细菌总ＤＮＡ，琼脂糖 凝胶电泳检测后保存于一２０℃备用。ＰＣＲ扩增反应体系 （２５ ）：ＤＮＡ模版１ ｔｔＬ，上游引物（２７Ｆ：ＡＧＡＧ１１ ｒＧＡＴｃＡＴ— ＧＧＣＴＣＡ）１ ｔＬＬ，下游引物（１４９２ Ｒ：ＧＡＧＡＧＴＩ￣ＧＡＴＣＡＴＧ— 之一，尤其在鱼类肠道细菌研究方面取得了一定的进展 。 。 但是，目前关于鱼类鳃中细菌分布的研究还不够深入，国内外 文献鲜有报道 。最近，陈强等采用１６Ｓ ｒＤＮＡ测序等方法 对欧洲鳗（Ａｎｇｕｉｌｌａ ａｎｇｕｉＵａ）迟钝爱德华氏菌进行了分子鉴 定，在ＧｅｎＢａｎｋ上经序列比对发现同源率达９９％ 。本试验 对鱼类鳃中迟钝爱德华氏菌进行了形态特征观察、１６Ｓ ｒＤＮＡ ＧＣＴＣＡＧ）１ ，Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １２．５１．ＬＬ，双蒸水９．５ Ｌ。ＰＣＲ循 环参数：９４ ｏＣ预变性５ ｍｉｎ；９５℃变性４５ Ｓ，５５℃退火４５ Ｓ， ｍｉｎ，３０个循环；７２℃延伸１０ ｍｉｎ，４℃保存。琼 测序等系统鉴定，不仅为鱼类鳃中细菌的组成与功能研究提 ７２℃延伸１脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ结果，ＰＣＲ产物切胶回收连接 供了科学参考，而且为鱼病防治等奠定了基础。 ｐＭＤ１８一Ｔ载体，转化大肠埃希菌ＤＨ５ａ筛选阳性克隆，送上 １材料与方法 海生工生物工程有限公司测序。将１６Ｓ ｒＤＮＡ序列通过ＮＣＢＩ 的Ｂｌａｓｔ检索系统进行序列同源性分析，使用ＣｌｕｓｔａｌＸ软件进 行多序列比对，采用ＭＥＧＡ ４软件邻接法（ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｊｏｉｎｉｎｇ）构 建系统发育树。 ２结果与分析 收稿日期：２０１２—１１—０１ 基金项目：国家自然科学基金（编号：３０８００８４７）。 作者简介：王艺（１９８７一），女，江苏徐州人，硕士研究生，研究方向 为预防兽医学。Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙｉ ８７０７１２＠１６３．ｃｏｒｎ。 通信作者：李槿年，教授，硕士生导师，主要从事微生物与免疫学研 究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｊｉｎｎｉａｎ２０００＠１６３．ｃｏｒｎ。 ２．１分离茵形态及培养特征 从鲫鱼鳃中分离纯化获得１株细菌，暂时编号为Ｅｔ一１， 学。２００１． 【２］杨再福，张阿林，赵林娥．锦鲤的人工繁殖技术［Ｊ］．科学养鱼， １９９９（１）：３８． ［６］汪学杰，胡隐昌，牟希东，等．优质锦鲤的繁殖和培育技术［Ｊ］． 娜．天然增艳物质对池塘养殖锦鲤体色的 内陆水产，２００８（５）：３７—３９． ［３］孙向军，李铁梁，姜影响研究【Ｊ］．饲料工业，２０１０，３１（８）：１９—２０． ［４］日珊珊．红白锦鲤着色效果的初步研究［Ｄ］．天津：天津农学 院，２０１０． ［５］韩学哲．饵料中不同添加物对观赏鱼体色的影响［Ｄ］．河北大 【７］陈万光．池塘精养日本锦鲤成鱼试验［Ｊ］．淡水渔业，２００３，３３ （５）：３９—４ｏ． ［８］陈万光，张耀武，郭国强．日本锦鲤亲鱼培育及人工繁殖技术 ［Ｊ］．安徽农业科学，２００７，３５（１９）：５７７３—５７７４．