Experimental research | 试验研究畜产品中喹诺酮类药物检测技术陈迪（广东省广州市白云区农产品质量安全检测中心，广州 510470）摘要：喹诺酮类药物（FQNS）是含有氟元素的喹啉环烯衍生物，该类药物具有良好的抗菌特性，能很好地被动物机体所吸收，治疗成效相对较高，价格相对较为便宜，在临床疾病防治中具有很好的应用。但随着该种抗生素的应用比例不断增加，很多养殖户的不科学用药行为造成的药物残留和病原，尿性增加的态势越来越严重。目前喹诺酮类抗生素已被广泛应用到各种家畜家禽水产的疾病治疗和预防工作中，在控制细菌感染，增加动物生长速度方面发挥不可替代的作用。由于其耐药性和潜在的致癌性引起广泛的关注。研究以鸡肉组织为例探讨畜禽产品中喹诺酮类药物的检测技术。关键词：畜产品；喹诺酮类药物；检测技术中图分类号：Ｒ１５５．５ 文献标识码：Ｂ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９６－３６３７．２０２１．０１．０１５Detection Technology of Quinolones in Animal ProductsChen Di（Agricultural Products Quality and Safety Inspection Center of Baiyun District，Guangzhou City，Guangdong Province，Guangzhou 510470，China）Abstract：Quinolones（FQNS） are derivatives of quinolines containing fluorine，which have good antibacterial properties，can be well absorbed by animal body，and have relatively high therapeutic effect and relatively low price，it has a good application in clinical disease prevention and treatment．However，with the increasing proportion of the use of antibiotics，many farmers unscientific drug use behavior caused by drug residues and pathogens，the situation of increasing urine more and more serious．At present，quinolone antibiotics have been widely used in the treatment and prevention of various livestock and poultry aquatic diseases，and play an irreplaceable role in controlling bacterial infection and increasing the growth rate of animals．Due to its drug resistance and potential carcinogenicity，it has attracted extensive attention．A method for the determination of quinolones in poultry and livestock products was studied．Key words：animal products，quinolones，detection techniques0 引言喹诺酮类抗生素的主药抑菌作用是通过阻断细菌DNA回旋酶的正常形成，使DNA不能正常复制，正常形成，造成细菌破裂死亡，达到抑菌抗菌的效果[1]。喹诺酮类抗生素在抵御某些细菌、支原体、球虫等方面具有很好的作用，是养殖生产中应用最为常见的一类抗生素类药物[2]。近年我国畜禽养殖产业发展中盲目用药造成的抗生素药物残留的现象日趋严重，已成为污染环境，影响人类身体健康的主要因素。但是很多养殖户盲目追求经济效益，在动物的饲养管理环节，饲料或饮用水中，会盲目增加喹诺酮类抗生素的使用量和使用种类，造成动物机体中的药物不能被很好消化利用，严重的药物残留超标。而残留超标的抗生素通过饮食渠道进入人体后，轻者会出现一系列的过敏反应或中毒反应，严重的会损害脏器器官，造成休克死亡，威胁到消费者的身心健康。1 材料与方法1.1 材料选择研究所选择的鸡肉组织来源于广州13个大中型农产品市场，共采集40份，分别进行编号处理。1.2 试剂与试剂盒研究选择使用喹诺酮类药物残留检测试剂盒（山东绿都生物科技有限公司生产，产品编号SPLD020），试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中喹诺酮类的残留量。适合定量检测组织、生鲜奶样本中喹诺酮类残留。所需仪器主要包括了微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL，50 mL）。微量移液器：单道1～10 μL、10～100 μL、多道50～300 μL试剂：去离子水、乙腈、正己烷。试剂盒是由喹诺酮类酶标板12×8孔，喹诺酮类标准品*5（0.5～1 mL），喹诺酮类酶标物（7 mL），喹诺酮类抗体（7 mL），底物液A液（7 mL），底物液作者简介：陈迪（1992-），男，广东茂名人，大学本科，助理畜牧师，研究方向：畜牧产品、水产品等农用产品的检测与检验方法。34 ·2021.01Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.试验研究 | Experimental researchB液（7 mL），终止液（7 mL），20×浓缩洗涤液（40 mL），2×喹诺酮类样品稀释液（40 mL）组成。A、B、C、D、E共5个标准品浓度为0、0.1、0.3、0.9、2.7 ppb，A、B标准品各1 mL，其余各0.5 mL，直接使用。1.3 样品处理配液首先，在整个试验操作中，必须保证样品洁净，使用一次性吸头，避免在操作中出现污染现象，影响到最终的检测结果。其次，洗涤工作液配制。用去离子水将20×浓缩洗涤液按1∶19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4 ℃环境可保存1月，用前1 d取出回温。配液2∶1×喹诺酮类样品稀释液用去离子水将2×喹诺酮类样品稀释液按1∶1的体积比进行稀释，用于样本前处理的稀释。1.4 样本前处理首先，样本处理前须知，处理完的样品应及时进行下步检测，试验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。其次，组织（稀释倍数：100）称取鸡肉样品（1.0±0.05）g至50 mL离心管中，加入2 mL 0.01 mol/L氢氧化钠，震荡提取1 min，向其中加入2 mL的乙腈按照上述方法处理1 min，然后将溶液放置在4 000 r/min的离心液中处理5 min，小心地取上层清液转移到另一个离心管中，向其中加入配置好的缓冲稀释液震荡30 s进行分析。1.5 检测程序按照试剂盒使用说明书的要求开展操作，将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹诺酮类实际浓度。1.6 操作注意事项第一，根据体积大小不同取出回温的时间从1～3 h，体积15 mL以上的先从冷藏环境取出回温，洗板拍干后应立即进行下一步操作。第二，反应终止液为2 mol/L硫酸，避免接触皮肤。第三，不使用已过有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。第四，标准的吸光度（450/630 nm）值小于0.5（A450 nm<0.5）时，表示试剂可能变质。第五，在加入底物液A液和底物液B液后，显色时间为15 min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20 min，反之则减短反应时间。第六，底物液B液长期使用变为浅蓝色时，请放心使用，不影响检测结果。的吸光度值，检测得到的40份鸡肉样品中喹诺酮药物残留吸光度值见表1。表1 40份鸡肉样品中喹诺酮药物残留吸光度值2.8972.8832.3162.0131.6621.5980.8280.7730.4740.3970.2850.3000.5130.5590.4390.4840.5250.5330.4560.7350.2780.3470.6070.5520.4150.3510.5220.4620.4030.4300.3570.4770.5590.5420.4590.4930.5640.4590.5960.4802.2 40份鸡肉样品中喹诺酮类药物残留量采集的40份鸡肉样品中，喹诺酮类抗生素的残留量为14.5～60 ng/mL，其中有20份鸡肉样品中喹诺酮类抗生素的残留量14.5～28.5 ng/mL，剩余样品的喹诺酮类抗生素的残留量28.5～60 ng/mL，低于国家规定的限定标准。结合检测结果，本次研究所选定的检测技术，灵敏性较高，针对性较强。虽然鸡肉组织当中喹诺酮类抗生素的药物残留不没有超过国家最低标准，但是40份鸡肉组织当中均检测出抗生素残留，这需提高重视程度，加强对养殖，生产加工等诸多环节的有效控制，强化检验检疫，发现违规行为，及时采取措施打击。3 讨论与结论目前畜禽产品中检测喹诺酮类抗生素常用的技术手段，包括液相色谱法，色谱质谱联用法、荧光免疫检测法、免疫学检测法、胶体金免疫层析技术等[3]，研究主要选择使用胶体金免疫层析技术中的竞争法，通过使用喹诺酮类抗生素检测试剂盒定量分析鸡肉组织中喹诺酮药物的残留量，相对于其他检测手段灵活方便，检测时间较短，30 min即可以出结果，不需要投入较为昂贵的仪器设备，也不需进行针对性的仪器设备维护，操作简便，适合现场畜禽产品质量检测，或者大规模的畜禽产品质量检测。检测结果显示40份样品中可做同类药物的残留量14.5～60 ng/mL，没有达到国家规定的最高残留限量，一方面表示市场中的鸡肉制品相对比较安全，另一方面也存在不同程度的抗生素残留情况，需要提高重视程度，对养殖销售和生产环节作出进一步的优化，严格控制抗生素的使用。参考文献[1] 王丽娟，张骊，钱卓真，等．液相色谱检测水产品中喹诺酮类药物的方法改进研究[J]．中国兽药杂志，2015，49（5）：37-42．[2] 蒲敬伟，刘河疆，陈贺．屠宰场猪肉中沙星类抗生素的测定[J]．养殖与饲料，2018（1）：10-11．[3] 钱卓真，梁焱，王丽娟，等．分散固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定沉积物中氟喹诺酮类药物残留[J]．渔业研究，2018，40（4）：286-294．2 结果2.1 40份鸡肉样品中喹诺酮药物残留吸光度值按照喹诺酮类药物残留检测试剂盒（山东绿都生物科技有限公司生产，产品编号SPLD020）使用说明的要求加好被检测的样品，用酶标仪在450 nm处测定每个孔2021.01·Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.35