鞍山师范学院学报 ２０１６－０８，１８（４）：２４—２７ 紫苏籽中脂肪酸及主成分０／，一亚麻酸的分析 回瑞华，刁全平，侯冬岩，李铁纯 （鞍山师范学院化学与生命科学学院，辽宁鞍山１１４００７） 摘要对紫苏籽脂肪酸的组成和主成分 一亚麻酸进行分析．采用索氏提取法对紫苏籽中脂肪油进行提 取，并进行甲酯化处理，利用气相色谱一质谱法对其脂肪酸组成进行鉴定．由紫苏籽中分离鉴定出８种脂肪 酸，占紫苏籽油总量的９５．８０％．主要含有ｏ【一亚麻酸６６．４５％、棕榈酸１７．３０％、亚油酸２．６２％、油酸２．２５％．用 高效液相色谱法对主成分０【－亚麻酸进行了定量分析，含量为２７５ ｍｇ／ｇ． 关键词紫苏籽；脂肪酸；气相色谱．质谱联用；高效液相色谱；０【一亚麻酸 Ｒ２８２．７１ 文献标识码Ａ 文章篇号１００８—２４４１（２０１６）０４—０ｏ２４—０４ 中图分类号紫苏（Ｐｅｒｉｌｌａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ Ｌ．Ｂｒｉｔｔ．）为一年生唇形科草本植物，是一种分布较广泛的植物，全国各地均 产，主要分布在华北、华中、华南、西南等地，在我国已有悠久的种植历史ｌｌ１．紫苏是卫生部首批颁布的 既是食品又是药品的６０种“药食同源”品种之一，可以开发出多种保健食品ｌ２，３１．传统上我国北方紫苏 以榨油为主，兼作药用，南方紫苏主要以药用为主，兼作香料和食用． 现代研究表明，紫苏茎、叶和紫苏籽中含有多种活性成分，如萜类、黄酮类、甙类、类脂类、花青素、多 糖、微量元素和不饱和脂肪酸等Ｉ４，５＿．紫苏籽中含大量油脂，含油量达４５％以上，其中， ．亚麻酸占总脂 肪酸的５０％以上． ．亚麻酸是人体必需的营养素之一，人体若缺乏会导致各种功能性障碍和代谢紊 乱＿６ｊ，尤其是胎儿、婴幼儿及儿童，会对大脑发育造成不利影响．医学证实大脑的６０％由特定脂肪酸构 成，只有仅．亚麻酸能在体内合成ＤＨＡ以完成大脑发育需要 ．０【一亚麻酸对人体有显著的保健功能如降 低胆固醇、提高记忆力、保护视力、增强免疫力、延缓机体衰老、预防老年痴呆和心脑血管疾病、抗癌、抗 衰老、促进大脑发育等ｌ １（】Ｊ．近年来关于紫苏的研究较多，本文采用索氏提取法对紫苏籽中脂肪油进行 提取，并进行甲酯化处理，利用气相色谱一质谱法对其脂肪酸组成进行鉴定，用高效液相色谱法对主成分 仅．亚麻酸进行定量分析，为开发利用紫苏籽提供科学依据． １实验部分 １．１主要仪器与试剂 ＨＰ６８９０ＧＣ／５９７３ＭＳ型气相色谱－质谱联用仪，美国惠普公司；Ｒ２－２０１型旋转蒸发器，上海中科机械研 究所；５１０型高效液相色谱仪（美国Ｗａｔｅｒｓ公司）；ＰＨＳ一３Ｃ精密数显酸度计（上海天达仪器有限公司）． 无水乙醇、无水甲醇、无水乙醚、石油醚（６Ｏ～９０ ｏＣ）、异丙醇、乙腈、冰乙酸、抗坏血酸、硫酸、氢氧化 钾及氢氧化钠（所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水）． ０【一亚麻标准品：中国药品生物制品鉴定所． 紫苏籽样品：产于辽宁抚顺；样品的处理：紫苏籽去壳２５ ｏＣ自然干燥，粉碎后备用． １．２紫苏籽脂肪油的提取 称取２５ ｇ处理过的紫苏籽粉，放人滤纸筒中，装人索氏提取器中，加入１５０ ｍＬ的石油醚，回流萃取 收稿日期２０１６－０５—１６ 基金项目 辽宁省教育厅科学技术基金资助课题（２０３３１０７９）． 作者简介回瑞华（１９４５一），女，辽宁海城人，鞍山师范学院化学与生命科学学院教授，从事有机分析及天然产物化学教学与研究 第４期 回瑞华，等：紫苏籽中脂肪酸及主成分仅．亚麻酸的分析 ６ ｈ，得黄色透明萃取液，再用旋转蒸发器除去石油醚，得紫苏籽脂肪油１１．２５ ｇ，产率４５％． １．３脂肪酸的甲酯化 取紫苏籽脂肪油１ ｍＬ，加入正己烷４ ｍＬ，再加ＮａＯＨ—ＣＨ，ＯＨ甲醇液（０．５ ｍｏｌ／Ｌ）２ ｍＬ，置水浴上 ７Ｏ ｃＣ回流１０ ｍｉｎ，取出冷却移至刻度试管中，加水至２０ ｍＬ，振荡、超声、离心．取上层清液，待做ＧＣ。ＭＳ 分析［１１，ｌ ２１． １．４ ＧＣ／ＭＳ测定条件 １．４．１气相色谱条件 色谱柱ＨＰ一５（３０ ｍＸ０．２５ ｍｍｘ０．２５ ｍ）弹性石英毛细管柱．升温程序：初 始温度１２０ ｏＣ，以２０￣Ｃ／ｍｉｎ升至２００ ｏＣ，以２．５℃／ｍｉｎ升至２３０ ｏＣ，再以１０℃／ｍｉｎ升至２７０ ｏＣ（保留 ２ ｍｉｎ）；汽化温度２９０℃；进样量０．３ Ｌ；载气（Ｈｅ）流量１ ｍＬ／ｍｉｎ；分流比：２０：１；溶剂延迟３ ｍｉｎ． １．４．２质谱条件 １．５实验步骤 电子轰击（ＥＩ）离子源；离子源温度２３０℃；四极杆温度１５０ ｏＣ；倍增器电压１ ３４１ Ｖ； 电子能量７０ ｅＶ；发射电流３４．６ ｕＡ；接口温度２３０ ｏＣ；质量扫描范围２０～５００ ｍ／ｚ． 取经１．３处理过的紫苏籽脂肪油样品０．３ ｌｘＬ，用气相色谱．质谱一计算机联用仪进行分析鉴定，通过 Ｇ１７０１ＢＡ化学工作站数据处理系统，检索Ｎｉｓ９８谱图库，分别与八峰索引及ＥＰＡ／ＮＩＨ质谱图集的标准 谱图进行对照、复合，再结合有关文献进行人工谱图解析，确定样品各个化学成分．通过Ｇ１７０１ＢＡ化学 工作站数据处理系统，按面积归一化法进行定量分析，分别求得各化学成分的相对百分含量． 按实验步骤进行实验，由化学工作站给出紫苏籽脂肪酸甲酯的总离子流图，如图１所示． ． Ｌ． Ｉ －．． ‘ Ｉ ． Ｉ ｌ １ ．．Ｊ． ＾． １ 『ｌ 图１紫苏籽脂肪酸甲酯的总离子流色谱图 将确认的紫苏籽中的脂肪酸及求得的各脂肪酸在其油中相对百分含量列入表１． 表１紫苏籽中脂肪酸鉴定结果 由表１紫苏籽中脂肪酸鉴定结果可知：鉴定出８种脂肪酸，共占紫苏籽油总量的９５．８０％，主要含有 鞍山师范学院学报 第１８卷 ｏ【．亚麻酸６６．４５％、棕榈酸１７．３０％、亚油酸２．６２％、油酸２．２５％． １．６紫苏籽中ｏ【一亚麻酸的ＨＰＬＣ定量分析 １．６．１样品前处理 称取紫苏籽粉２ ｇ，加入５０ ｍＬ无水乙醇，１０ ｍＬ ５０％ＫＯＨ水溶液，５ ｒｏＬｌ０％抗 坏血酸溶液，回流皂化２ ｈ，用石油醚萃取３次，每次３０ ｍＬ，弃去石油醚层，保留无机层；用乙酸调节无 机层，使得ｐＨ＝４，然后再用石油醚萃取３次，每次３０ ｍＬ，弃去水层，合并石油醚层，用无水Ｎａ ＳＯ 干燥 ２４ ｈ后，旋转蒸发得油状液体ｌｌ ． １．６．２色谱条件 色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ （１５０ ｍｍ￣４．６ ｍｍ，５ ｍ）（中国科学院大连化学物理研究所）； 流动相：异丙醇：乙腈＝３５：６５；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５℃；检测波长：２０５ ｎｍ；进样量：１０ Ｌ． １．６．３ ｄ一亚麻酸标准品和样品的液相色谱峰保留时间 准确称取５．０ ｍｇ 一亚麻酸标准品，用异丙醇 定容至１０ ｍＬ，按１．６．２色谱条件，进样得到 －亚麻酸的色谱峰保留时间为３．８５ ｍｉｎ，精密称取经１．６．１ 处理的样品５０．０ ｍｇ，用异丙醇定容到１０ ｍＬ，按１．６．２色谱条件进样得到样品的色谱图在保留时间为 ３．８５ ｍｉｎ处有吸收峰． １．６．４标准曲线的绘制 准确称取５．０ ｍｇ 一亚麻酸标准品用异丙醇定容至１０ ｍＬ，分别准确吸取２， ４，６，８，ｌ０ Ｌ，用异丙醇定容至１０ ｍＬ，每个样进３次，测量峰面积，并计算其平均值． 一亚麻酸浓度与色 谱峰面积之间的回归方程为： Ｙ＝２×１０ Ｘ＋２×１０ ， ＝０．９９９ ５． １．６．５样品的测定 准确称取经１．６．１处理的紫苏籽样品５０．０ ｍｇ，用异丙醇定容到１０ ｍＬ，按１．６．２ 色谱条件测定３次，取其平均值计算紫苏籽样品中 －亚麻酸的百分含量为２７５ ｍｇ／ｇ． ２结果与讨论 ２．１方法的精密度实验 分别取ｄ－亚麻酸标准品２，４，６，８，１０ ＩｘＬ，用异丙醇定容至１０ ｍＬ，每个体积平行进样９次坝０得峰面 积并求出标准偏差和变异系数，结果见表２． 表２ ｄ一亚麻酸标准偏差和变异系数（Ｉｌｌ＝９） ２．２回收率实验 分别取紫苏籽按１．６．１处理样品３Ｏ，４ｏ，５０ ｍｇ，各加入仅一亚麻酸１．００ ｍｇ，分别用异丙醇定容至１０ ｍＬ， 每种含量的紫苏籽样品测定３次，计算回收率为１０２．５～１００．２． ２．３结果讨论 由上述实验结果可知紫苏籽中主要化学成分为不饱和脂肪酸，其中主要成分为 一亚麻酸．分析植物 种子油中的 一亚麻酸通常的方法是将它们衍生为易挥发的甲酯衍生物，经气相色谱分离，但在甲酯化 的过程中可能会产生不完全甲酯化衍生物、氧化或者水解等反应．采用高效液相色谱法较气相色谱法的 主要优点是色谱条件温和、适于极性的、低挥发性及对热敏感的化合物，可以避免衍生过程的异构化．迄 今，不经衍生化采用高效液相色谱法分析植物种子油中的仅．亚麻酸的分析少见报道，该方法快速，重复 性及准确度令人满意． 参考文献 ［１］易诚．紫苏资源的开发与利用［Ｊ］．特产研究，２ｏｏ３（４）：５７－６１ 第４期 回瑞华，等：紫苏籽中脂肪酸及主成分 一亚麻酸的分析 ２７ ［２］黄明发，郭莉，郑炯，等．紫苏的研究进展［Ｊ］．中国食品添加剂，２００７（３）：８５－８９． ［３］韦保耀，黄丽，滕建文．紫苏属植物的研究进展［Ｊ］．食品科学，２００５，２６（４）：２７４—２７６． ［４］蒲海燕，李影球，李梅．紫苏的功能性成分及其产品开发［Ｊ］．中国食品添加剂，２００９（２）：１３３—１３７． ［５］回瑞华，侯冬岩，李铁纯．苯芴酮一分光光度法测定紫苏茎叶、籽中的锗［Ｊ］．食品工业科技，２００４，２５（６）：１２５—１２７． ［６］吴旭锦，朱小甫，郭泾利．紫苏子油的应用研究进展［Ｊ］．养殖技术顾问，２０１１，３９（８）：８４． 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ｓｅｅｄ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ９５．８０％ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ Ｐｅｒｉｌｌａ ｓｅｅｄ ｏｉｌ．Ｍａｉｎｌｙ ｃｏｎｔａｉｎ ｌｐｈａ ａｌｉｎ— ｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ，ｐａｌｍｉｔｉｃ ａｃｉｄ，ｌｉｎｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ １７．３０％ａｎｄ ２．６２％，６６．４５％ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ２．２５％．Ｕｓｉｎｇ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌｐｈａ ｌａｉｎｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ， ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ２７５ ｍｇ／ｇ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｐｅｒｉｌｌａ ｓｅｅｄ；ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ；ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ；ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａ— ｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）；ａｌｐｈａ ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ （责任编辑：陈欣） （上接第２３页） Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｒａｗ ｐｕｅｒ ｔｅａ ａｎｄ ｃｏｏｋｅｄ ｐｕｅｒ ｔｅａ ｂｙ ＨＰＬＣ ＨＯＵ Ｄｏｎｇｙａｎ，ＤＩＡＯ Ｑｕａｎｐｉｎｇ，ＬＩ Ｔｉｅｃｈｕｎ，ＨＵＩ Ｒｕｉｈｕａ，ＹＵＡＮ Ｈｕａｆａｎｇ （Ｓｃｏｏｌｈ ｆＣｈｏｅｍｉｓｔｙ ｒａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｃｅ，ｎＡｎｓｈａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｎｓｈａｎ Ｌｉａｏｎｉｎｇ １１４００７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｉｎ ｒａｗ ｎｄ ａｃｏｏｋｅｄ ｐｕｅｒ ｔｅａ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ，ｗｉｔｈ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ ｌ８ ａｓ Ｃｏｌｕｍｎ。ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ—ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ—ｄｉｍｅｔｈｙｌ ａｍｉｄｅ（７０：３０：０．０５：０．０５，Ｖ／Ｖ）ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，２５ ａｓ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，２７４ ｎｍ ａｓ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，ａｎｄ ５ ａｓ ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ．Ｔｈｅ ｃｏｅｆｉｆｃｉｅｎｔ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｉｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ３．９６％．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｉｓ ９０．６２％～９０．６２％．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃａｆｅｉｎｅ ｉｎ ｒａｗ ａｎｄ ｃｏｏｋｅｄ ｐｕｅｒ ｔｅａ ｗｅｒｅ １９．９２ ｍｇ／ｇ ａｎｄ ２８．５８ ｍｇ／ｇ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｒａｗ ｐｕｅｒ ｔｅａ；ｃｏｏｋｅｄ ｐｕｅｒ ｔｅａ；ｃａｆｆｅｉｎｅ （责任编辑：陈欣）